Vóór het experiment moeten alle reagentia en monsters op kamertemperatuur worden gebracht; na het opnieuw smelten moeten de monsters opnieuw worden gecentrifugeerd en moet het supernatant worden genomen om te testen; voor reagentia of monstervoorbereiding, meng en vermijd schuimvorming; kalibratie en monsters worden aanbevolen voor duplicaattesten.

1. Voeg toe: voeg de standaard werkoplossing achtereenvolgens toe aan de eerste twee putjes en voeg twee gaten toe voor elke concentratie werkoplossing, 100 μ L van elk putje. Monsters die getest moeten worden, worden toegevoegd aan andere putjes, 100 μ L per putje (voor monsterconcentratie boven het testbereik, monster verdund met standaard & monsterverdunningen). De microplaat werd met een film bekleed en geïncubeerd bij 37°C ℃ gedurende 90 minuten. Tip: probeer bij het toevoegen van het monster aan de onderkant van de microplaat de wand van het gat niet aan te raken, schud en meng voorzichtig om te voorkomen dat er luchtbellen ontstaan. De extra tijd moet binnen 10 minuten worden gecontroleerd.

2. Gebiotinyleerd antilichaam/antigeen: gooi de vloeistof weg en schud droog, zonder wassen. 100 μl gebiotinyleerd antilichaam/antigeen-werkoplossing werd onmiddellijk aan elk putje toegevoegd, gemengd, microplaat plus film-gecoat en gedurende 1 uur bij 37°C geïncubeerd.

3. Wassen: schud de vloeistof in het gat, voeg 350 μL wasvloeistof toe aan elk putje, laat 1-2 minuten weken, zuig of schud de vloeistof in de microplaat af en dep droog op het dikke absorberende papier. Herhaal deze wasplaatstap 3 keer. Tip: De wasmachine kan hier en in andere wasstappen worden gebruikt. Elke wasstap is essentieel voor het experiment.

4. HRP-enzymconjugaat: 100 μ L enzymconjugaatwerkoplossing per putje, gemengd, bedekt met film en geïncubeerd bij 37 ℃ voor 30 minuten.

5. Wassen: gooi de vloeistof in de put weg en was de plaat 5 keer op dezelfde manier als stap 3.

6. Substraat: voeg 90 μL substraatoplossing (TMB) toe aan elk putje, meng goed, voeg filmcoating toe en incubeer ongeveer 15 minuten bij 37 ℃. Opmerking: De incubatietijd moet worden verkort of verlengd op basis van de werkelijke kleurontwikkelingssituatie, maar niet meer dan 30 minuten. Het kan worden beëindigd wanneer er een duidelijk verloop in het standaardgat verschijnt.

7. Beëindiging: voeg 50 toe μ L beëindigingsoplossing aan elk putje om de reactie te beëindigen. Opmerking: de optelvolgorde van de beëindigingsoplossing moet dezelfde zijn als die van de substraatoplossing.

8. Lezen: meet onmiddellijk de optische dichtheid (OD) van elk putje bij 450 nm met een microplaatlezer. De microplaatlezer moet van tevoren worden geopend om de testprocedure in te stellen.

9. Plaats het ongebruikte reagens na het experiment terug in de koelkast volgens de aangegeven bewaartemperatuur tot de houdbaarheidsdatum.