Als hulpmateriaal bij ELISA-detectie-experimenten, een enzym bord speelt een beslissende rol en heeft rechtstreeks invloed op de uiteindelijke experimentele resultaten. De kwaliteit van de Enzym plaat hangt voornamelijk af van de gevoeligheid voor eiwitadsorptie, het verschil in eiwitadsorptiecapaciteit tussen bordn en gaten, en het verschil tussen partijen gekochte enzym plaat . Kies daarom voor een enzym plaat product met een hoge gevoeligheid voor eiwitadsorptie, het kleine verschil tussen gaten in de capaciteit van eiwitadsorptie en een klein verschil tussen batches is de garantie voor de experimentator om betrouwbare en stabiele experimentele resultaten te verkrijgen.

Enzym plaat classificatie: volgens verschillende classificatienormen, de plaat heeft verschillende classificaties.

1: Volgens het aantal gaten kan het worden verdeeld in 96 gaten, 48 gaten, enz. Omdat de enzym plaat wordt voornamelijk gebruikt met de microplaatlezer, de plate meter op de markt is maximaal 96 gaatjes, dus de microplaat is 96 gaatjes.

2: Volgens de verschillende bodems is het verdeeld in platte bodem, U-bodem, V-bodem, enz.

De brekingsindex van de platte basis is laag, wat geschikt is voor detectie in de microplaat;

T De brekingsindex van de U-microplaat is hoog, handig voor bemonstering, bemonstering en menging, en kan de kleurverandering direct waarnemen zonder deze op de microplaat te plaatsen, om te bepalen of er een overeenkomstige immuunreactie is.

De microplaat van de V-basis kan het monster nauwkeurig absorberen.

3: Volgens de verschillende bindingsmogelijkheden van de microplaat en eiwitten en andere moleculen, is het verdeeld in hoge bindingskracht, gemiddelde bindingskracht en aminering.

(1) Hoge bindkracht

Na het oppervlak van deze microplaat is het eiwitbindend vermogen aanzienlijk verbeterd, tot 300 ~ 400 ng IgG / cm2, en het molecuulgewicht van het belangrijkste gebonden eiwit is> 10 kD. Het gebruik van deze klasse microplaten kan de gevoeligheid verbeteren en kan de concentratie en hoeveelheid gecoat eiwit relatief verminderen, wat gemakkelijker is om niet-specifieke reacties te produceren. Na het coaten met antigeen of antilichaam kan het niet-ionische detergens de plaats van het ongebonden eiwit niet effectief afdichten en moet het eiwit als afdichtmiddel worden gebruikt.

(2) Gemiddelde bindkracht

Dergelijke microplaatplaten binden zich passief aan het eiwit via hydrofobe bindingen op het oppervlak en zijn geschikt als dragers in de vaste fase voor macromoleculaire eiwitten met een molecuulgewicht > 20 kD, met een eiwitbindend vermogen van 200 tot 300 ng IgG/cm2. Vanwege de kenmerken van zijn enige binding aan macromoleculen, is het geschikt voor dragers in de vaste fase als ongezuiverde antilichamen of antigenen om het potentieel voor niet-specifieke kruisreactiviteit te verminderen. De plaat kan een inert eiwit zijn of een niet-ionisch detergens als afdichtingsoplossing.

(3) Aminatie

Deze microtiterplaat heeft na een oppervlaktemodificatie een positief geladen aminogroep, waarvan de hydrofobe binding is vervangen door een hydrofiele binding. Deze klasse van microtiterplaten is geschikt als drager in vaste fase voor eiwitten met kleine moleculen. Met behulp van een geschikte buffer en pH bindt het oppervlak zich via ionische bindingen aan negatief geladen kleine moleculen. Vanwege de hydrofiele eigenschappen van het oppervlak en het vermogen om covalent te worden gebonden door andere crosslinkers, kan het worden gebruikt om eiwitmoleculen te fixeren die oplosbaar zijn in ontsmettingsmiddelen zoals Triton-100, Tween 20, enz. Het defect van deze plaat is vanwege verminderde hydrofobiciteit; bovendien moet het oppervlak effectief worden afgesloten. Vanwege de hydrofiele en covalente oppervlakte-eigenschappen moet de gebruikte afdichtingsoplossing een interactie kunnen aangaan met elke functionele groep in de niet-reactieve aminogroep en de geselecteerde crosslinker.

4. Volgens de kleur kan worden onderverdeeld in transparant, zwart en wit.

Transparant wordt het meest gebruikt voor de meest algemene enzymgekoppelde immunisatie-experimenten. In tegenstelling tot de transparante microtiterplaat zijn er ook ondoorzichtige microtiterplaten voor lichtdetectie, meestal zwart-wit. De zwarte microplaat zelf heeft lichtabsorptie, dus het signaal is veel lager dan de witte microplaat, dus wordt het over het algemeen gebruikt om sterk licht te detecteren, zoals fluorescentiedetectie. De witte microplaat wordt gebruikt voor detectie van zwak licht, vaak gebruikt voor algemene chemiluminescentie. Bovendien kan de zwarte microplaat ook het probleem van niet-specifieke reacties verzwakken. Tegelijkertijd is het belangrijk op te merken dat met de algemene microplaat geen lichtdetectie kan zijn, omdat het licht dat wordt uitgezonden door de chemiluminescentiereactie isotroop is, als bij een transparante microplaat het licht zich niet alleen vanuit de verticale richting zal verspreiden, maar ook vanuit de horizontale richting, maak licht gemakkelijk door de opening tussen het gat en de gatmuur, wat resulteert in het licht van de lichtabsorptiewaarde van het gat wordt beïnvloed door het aangrenzende gat uitgestraald licht.

Een goede microplaat moet een goede adsorptieprestatie hebben, een lage blancowaarde, een hoge transparantie van de bodem van het gat en vergelijkbare prestaties tussen de platen en tussen de gaten van dezelfde plaat. Vanwege het verschil in grondstoffen en het verschil in het productieproces, is de kwaliteit van verschillende producten zeer verschillend, daarom moeten de prestaties van elke batch microtiterplaat vooraf worden gecontroleerd voor gebruik. De algemeen gebruikte inspectiemethoden zijn een bepaalde concentratie van humaan IgG (meestal 10 ng/ml) gecoat met ELISA-plaatwells, na wassen, het toevoegen van een geschikte verdunning van enzym-gelabeld anti-humaan IgG-antilichaam aan elk well, wassen na hitteconservering, voeg substraatkleur toe, stop de enzymreactie en meet respectievelijk de absorptie van de oplossing in elk putje. De reactieomstandigheden werden zo geregeld dat de aflezing van elk putje op een absorptie van ongeveer 0,8 werd gehouden. Het gemiddelde van de totale aflezingen werd berekend. Het verschil tussen het gemiddelde van alle individuele metingen en alle metingen moet minder dan 10% zijn. De volgende drie microtiterplaten zijn A, B en C als voorbeeld.

Directe methode: om de adsorptie van menselijk IgG op het oppervlak van de microplaat te detecteren

Dubbele antilichaam-sandwichmethode: antigeen in serum positief voor anti-menselijk antilichaam

Zoals te zien is in de bovenstaande afbeelding, heeft klasse A microplaat in deze drie soorten bio-enzymplaten een beter eiwitadsorptie-effect, maar verbetert het ook de gevoeligheid van eiwitadsorptie, wat betrouwbaardere experimentele gegevens kan opleveren. Daarnaast kunt u vragen naar de plaat van het partijverschil. Het volgende is het partijverschil van een bepaalde plaat. Zoals te zien is in de gegevensgrafiek van het verschil binnen de batch, heeft de microtiterplaat een goede stabiliteit tussen de batches en is het verschil in de variatiecoëfficiënt (CV) binnen de batch ongeveer 5,0%, wat aanzienlijk lager is dan de variatiecoëfficiënt binnen de batch. onder 10,0% in de kwaliteitscontrolenorm voor klinische immuunreactie. Daarom is het ook geschikt voor ELISA-experimenten.