R ecologie

1. Verwijder de bevroren buis uit vloeibare stikstof en onmiddellijk in een waterbad van 37 ℃, licht schuddend. Nadat de vloeistof is gesmolten (ongeveer 1-1,5 minuut), haal je wat alcohol eruit en leg je het op de ultraschone werktafel.

2. Breng de celsuspensie in een centrifugebuis van 15 ml met 10 ml medium (was de bevroren buis met het medium en was alle cellen die aan de wand vastzitten) en centrifugeer bij 1000 gedurende 5 minuten.

3. Het supernatant werd omgekeerd en 1 ml van het medium werd toegevoegd om de cellen te suspenderen. Rook in een schaal van 10 cm met 10 ml medium en schud zachtjes naar links en rechts om de cellen gelijkmatig in de schaal te verdelen.

4. Markeer het celtype en de datum, de menselijke naam, enzovoort, plaats het in de CO2-incubator, plak de cellen en verander het medium.

5. Medium werd eens in de 3 dagen vervangen.

P assage

1. Planten werden gepasseerd om een ​​dekking van 80-90% te bereiken.

2. Abup het originele medium .

3. Voeg de juiste trypsine toe (bedek alleen de cellen) en verteer gedurende 1-2 minuten .

4. De digestie werd beëindigd door een gelijk volume van het serumbevattende medium toe te voegen .

5. Blaas de cellen met een pipetpistool en laat ze allemaal hangen.

6. Cellen werden opgezogen in een centrifugebuis van 15 ml en gedurende 5 minuten bij 1000 gecentrifugeerd.

7. Giet het supernatant en voeg 1-2 ml medium toe om alle cellen op te blazen.

8. Cellen werden overgebracht naar verschillende kweekschalen, afhankelijk van de celsoort. Over het algemeen worden kankercellen verdeeld in 5 cellen en worden er drie normale cellen overgedragen. Blijf cultiveren.

Vrij om de cellen te verteren en te centrifugeren (ibid. hierboven).

Hang de cellen op met de bijpassende bevroren opslagoplossing, verdeel ze in een gesteriliseerde vriesbuis, rust een paar minuten en specificeer het celtype en de bevroren opslagdatum. 4 ℃ 30 min, -20 ℃ 30 min, -80 ℃ 's nachts, en vervolgens opgeslagen in perfusie met vloeibare stikstof.

Bereiding van cryopreservatie-oplossing: 70% medium 20% FBS 10% DMSO. DMSO moet langzaam worden toegevoegd en gestaag worden geschud.